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标本制备步骤

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样品的制备有5个步骤: 1. 固定 取出待观察的样品后立即进行固定。它用于将样品永久固定并保存在尽可能逼真的状态。可以使用固定液或冷冻来进行: – 通过将生物材料浸入福尔马林溶液中来进行固定液中的固定。– 冷冻固定是将样品浸入组织冷冻介质中(环境温度下为液态,-20°C 下为固态),然后在液氮中冷却。冷冻样品保存直至切片。此步骤是根据为后续切片选择的方向在模具中进行的。2. 包埋 包埋是在固定液中固定之后的步骤。它包括在石蜡包埋介质中硬化样品,以便能够进行切片。有必要预先将样品脱水,用乙醇代替样品中的水分子。由于乙醇和石蜡不混溶,因此首先使用可与石蜡混溶的中间“清除”剂。清除步骤后,将样品浸入石蜡浴中。这些步骤是使用脱水自动机进行的。下面的嵌入步骤是通过使用嵌入中心来执行的。将样品放置在充满熔融石蜡的模具中,并根据其截面小心地定向。然后冷却所得块。接下来使用切片机对样品进行切片。3.使用切片或冷冻切片进行切片。切片是制备载玻片的重要步骤,因为它确保通过显微镜正确观察样品。– 使用切片机将石蜡包埋的样品按横截面切成 5 微米的薄片。载玻片上覆盖有含有添加剂的溶液,以保持切片附着在载玻片上。然后将载玻片放在加热板上,以确保样品均匀铺展。一旦载玻片被加热,就用手除去残留的液体。然后将载玻片在室温下干燥。– 使用低温恒温器切割冷冻样品。然后将冷冻切片置于载玻片上,在-80°C 下保存。Bioalternatives 根据您的样品和研究评估合适的固定和切片条件。为了最大限度地减少伪影,这些制备条件的选择至关重要。石蜡包埋有利于保存组织;冷冻更适合保存 DNA 和 RNA,以及标记水溶性元素或对固定介质敏感的元素。5. 使用产品将切片安装在载玻片和盖玻片之间以确保粘附。然后载玻片就可以储存或观察了。对于荧光显微镜观察,使用封固剂以暂时减少荧光损失。4. 染色和免疫标记——染色增加对比度,以识别和区分生物材料的不同成分。首先将样品脱蜡并再水化,以便极性染料可以浸渍组织。因此,不同的染料可以根据其亲和力与待染色的组分相互作用。染色完成后,对载玻片进行冲洗和脱水以进行安装步骤。– 免疫标记通过使用多克隆或单克隆抗体检测特定的细胞和组织成分(抗原)。将含有抗体的溶液沉积到样品上,然后清洗样品以去除未结合的抗体。

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